牛奶和奶粉中6種聚醚類抗生素殘留量測定分析條件的選擇

時間：2023-03-24 21:37:02來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

牛奶和奶粉中6種聚醚類抗生素殘留量測定分析條件的選擇

[db:作者] / 2022-12-26 00:00

20.2.1.7 分析條件的選擇

(1)提取方法選擇

本方法對比了用甲醇、乙腈、乙酸乙酯作為提取溶劑的回收率。

1)用甲醇作為提取溶劑

稱取5.0g(精確至0.01g)牛乳樣品于50mL離心管中，滴加5mol/L鹽酸調至pH約為4.6，并記錄鹽酸消耗量。加入15mL甲醇，渦旋混勻1min，置于50℃水浴30min，超聲波提取10min，以4000r/min離心10min。取上清液10mL，待凈化。

2)用乙腈作為提取溶劑

稱取5.0g(精確至0.01g)牛乳樣品于50mL離心管中，加無水硫酸鈉約3g和乙腈15mL，旋緊蓋子，渦旋混勻1min，振蕩10min，以3000r/min離心3min。移取.上層乙腈10mL，40℃水浴減壓濃縮近干，用5mL甲醇-水(1+1，v/v)溶解殘渣，待凈化。

3)用乙酸乙酯作為提取溶劑

稱取5g(精確至0.01g)牛乳樣品于50mL離心管中，無水硫酸鈉約3g和乙酸乙酯15mL，旋緊蓋子，渦旋混勻1min，振蕩10min，以5000r/min離心10min。移取上層乙酸乙酯層于圓底燒瓶中，再加入乙酸乙酯10mL，重復上述步驟，合并乙酸乙酯層40℃水浴減壓濃縮近干，用于SPE凈化。

按照上述三種提取方法測定添加濃度為10μg/kg的牛奶樣品中聚醚類抗生素回收率，每種方法做3個平行測定，見表20-5。對比試驗結果表明，用乙腈作為提取溶劑，基質背景相對干凈，基線噪音低，對提高檢測靈敏度效果明顯，提取效率高穩定，故選用乙腈作為提取溶劑。在加入無水硫酸鈉的條件下，渦旋混勻后，用超聲波提取10min，獲得穩定、滿意的回收率。

(2)凈化方法的選擇

牛奶和奶粉樣品提取溶液的凈化，文獻方法主要是固相萃取法，也有未凈化直接進樣的。本試驗對比研究了用正己烷液液萃取除脂法、SPE法和GPC的凈化效果。牛奶類樣品基質復雜，尤其是配方奶粉中，存在多種維生素等添加成分，采用液-液萃取法凈化，不足以去除奶粉中的干擾物質;聚醚類抗生素分子量分布范圍較寬(MW 612-934)，采用GPC凈化的收集時間長，與脂肪有共流出時段，凈化效果不夠理想;本方法采用正己烷除脂后，Oasis HLB固相萃取柱凈化，有效去除了雜質干擾，回收率均在85%～105%之間。

表20-5 比較三種提取方法的回收率(添加濃度為10μg/kg)

(3) 液相色譜-串聯質譜分析條件的確定

1) 優化質譜分析條件、確定母離子和監測離子

采用注射泵直接進樣方式，以10μL/min將聚醚類抗生素的標準溶液注入串聯質譜的離子源中。采用正離子掃描方式進行-級質譜分析，在選定的質譜條件下，聚醚類抗生素的產生穩定的強峰,確定了母離子(尼日利亞菌素母離子為[M+NH4]+，其余5種抗生素母離子均為[M+Na]+)，優化了電離電壓。對被測物的準分子離子碰撞后，進行二級質譜分析，得到子離子質譜圖，選擇了監測離子，確定子離子豐度，優化了碰撞能量。還對離子源溫度、脫溶劑氣溫度、脫溶劑氣流量、錐孔反吹氣流量等參數進行了優化。錐孔電壓、碰撞能量和駐留時間等質譜參數及母離子和子離子詳見表20-2。六種聚醚類抗生素的一級質譜圖和二級質譜圖見圖20-7至圖20-12。

圖20-7 拉沙洛菌素一級質譜(左)和二級質譜(右)圖

圖20-8 莫能菌素一級質譜圖(左)和二級質譜圖(右)

圖20-9 尼日利亞菌素一級質譜圖(左)和二級質譜圖(右)

圖20-10 鹽霉素一級質譜圖(左)和二級質譜圖(右)

圖20-11 甲基鹽霉素一級質譜圖(左)和二級質譜圖(右)

圖20-12 馬杜霉素一級質譜圖(左)和二級質譜圖(右)

2) 色譜條件的確定

根據文獻報道，選用通用性較強的BEH C18(1.7um，50mm×2.1mm)色譜柱，對混合標樣進行梯度洗脫，六種成分能得到很好的分離。用甲醇+水(含0.1%甲酸)為流動相，采用簡單的梯度洗脫模式，能使六種成分得到較好的分離，但峰型不對稱，有些拖尾，在水系流動相中加入5mmol/L乙酸銨后，峰形得到有效改善。確定的流動相組成為：A為甲醇，B為0.1%甲酸+5mmol/L乙酸銨水溶液，梯度洗脫。

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