吡唑酮類藥殘留測定——免疫分析法

時間：2023-03-25 00:47:54來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

吡唑酮類藥殘留測定——免疫分析法

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

(8)免疫分析法(immunoanalysis，IA)

免疫分析方法具有快速簡便、靈敏度高等優點，主要用于篩選檢測。吡唑酮類藥物的免疫學方法研究主要是放射免疫分析法(radioimmunoassay，RIA)，集中于20世紀80年代左右，近年來報道較少。RIA的原理是放射性標記抗原和未標記抗原(待測物)與不足量的特異性抗體競爭性地結合，反應后分離并測量放射性，而求得未標記抗原的量。

Takatori等最早制備4-重氮基安替比林免疫原。AA在酸性條件下，冰浴，將氨基重氮化，生成4-重氮基安替比林，再在堿性條件下與牛血清白蛋白偶聯，多次免疫家兔獲得安替比林抗體，建立了吡唑酮類藥物RIA方法。通過[3H]標記的安替比林和未標記安替比林競爭性結合安替比林特異性兔抗血清，檢測[3H]標記的安替比林進行定量，方法LOD為1ng，但未對實際樣品進行測定。Takatori等還制備了琥珀酸酐安替比林抗原。由于安替比林缺乏與蛋白偶聯的活性基團，而其代謝物AA則含有活性氨基。將AA和琥珀酸酐分別溶解于二氯甲烷，再將二者混合，室溫下反應，反應產物用硅膠薄層層析，展開劑為甲醇氯仿(90+10，v/v)，收取4-氨基琥珀酸酐-安替比林，再與氯甲酸異丁酯衍生，衍生產物直接與牛血清蛋白偶聯，獲得完全抗原，再免疫家兔，獲得抗體。該抗體的IC50分別為：安替比林6.8ng/mL，AA6.4ng/mL，安乃近2820ng/mL，氨丙吡酮8.5ng/mL，安乃近35.5ng/mL，IPA 1320 ng/mL，氨基比林2820ng/mL。以此建立的RIA方法，安替比林的LOD為1ng/mL，與其他吡唑酮類藥物無交叉反應，但未對生物樣品進行測定。

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