氯霉素類藥殘留測定——微生物法和免疫PCR法

時間：2023-03-25 07:21:47來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

氯霉素類藥殘留測定——微生物法和免疫PCR法

[db:作者] / 2022-12-09 00:00

4.1.4.2測定方法

CAPs殘留分析的測定方法主要有微生物法、免疫分析法、薄層色譜法、毛細管電泳法、色譜及色質聯用法等。基于抗原抗體特異性反應建立起來的免疫學測定方法具有靈敏度較高、特異性強、預處理簡單、分析時間短等優點，目前已經研制出一些成熟的試劑盒產品，使用方便，有著廣闊的應用前景色譜方法可檢出樣品中痕量的殘留藥物，具有檢測限低、精確度高等特點：而色質譜聯用技術更是目前唯一有效的確證手段，但是存在著操作復雜、時間長、成本較高的問題。

(1)微生物法(microbiological analysis， MA)

微生物法的主要原理是樣品中如有抗生素殘留，則會對培養基中的細菌產生抑菌圈，可以根據抑菌圈的有無及大小來判定結果。此種方法簡便、費用低，但耗時長，敏感性和專一性低，易漏檢，也會出現假陽性，引起誤判，僅適用于對高殘留量樣品進行篩檢。梅先芝等采用棉簽法(STOP)測定鯉魚肌肉組織殘留的CAP，用棉簽采集組織液后，置于枯草桿菌培養基中，保溫過夜，觀察抑菌圈有無及大小判斷殘留。該方法LOD為1.00u/g。焦彥朝等采用氯化三苯基四氮唑法(TTC)測定鯉魚肌肉組織CAP殘留，通過用TTC染色，量取抑菌圈直徑，計算檢測限及回收率。該方法平均回收率為51.3%～69.2%，LOD為0.25ug/g。

6)免疫PCR法(immuno polymerase chain reaction， IPCR)

IPCR是利用抗原抗體反應的特異性和PCR擴增反應的極高靈敏性而建立的一種微量抗原檢測技術。是用一段已知DNA分子標記抗體作為探針，用此探針與待測抗原反應，PCR擴增黏附在抗原抗體復合物上的這段DNA分子，電泳定性，根據特異性PCR產物的有無，來判斷待測抗原是否存在。劉京在制備CAP全抗原的基礎上，研制抗CAP單克隆抗體，利用抗CAP單克隆抗體建立IPCR分析法，檢測牛奶中CAP的殘留。以BSA、OVA為載體蛋白，采用EDC法制備CAP全抗原，免疫小鼠，制備抗CAP多克隆抗體。采用細胞融合和雜交瘤分選技術，經過篩選和亞克隆，成功獲得能穩定分泌抗CAP單克隆抗體的細胞株1B7，接種于Balb/c小鼠腹腔，得到的小鼠腹水經純化后效價為1：512000。以該抗體建立ELISA競爭抑制標準曲線，IC50和LOD分別為7.39ng/mL、0.24ng/mL，與CAPs的交叉率高達2052.8%，與其他藥物未見明顯交叉。當抗原包被濃度為10μg/mL，生物素酰化抗體的工作濃度為1：64000，親和素工作濃度為10μg/mL，生物素標記的DNA投入量為10pg時，建立的IPCR方法LOD為1.380pg/mL，批內、批間CV均小于10%。用于牛奶樣品中CAP檢測時，回收率為86.8%～106.0%，RSD為4.94%～7.51%。

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