磺胺類藥物殘留分析技術(shù)（五）

時間：2023-03-25 08:02:55來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

磺胺類藥物殘留分析技術(shù)（五）

[db:作者] / 2022-12-08 00:00

3)免疫親和色譜(immunoaffinity chromatography，IAC)

IAC以抗原抗體的特異性、可逆性免疫結(jié)合反應為基礎(chǔ)，當含有待測組分的樣品通過IAC柱時，固定抗體選擇性地結(jié)合待測物，其他不被識別的樣品雜質(zhì)則不受阻礙地流出IAC柱，經(jīng)洗滌除去雜質(zhì)后將抗原-抗體復合物解離，待測物被洗脫，樣品得到凈化。其優(yōu)點在于對目標化合物的高效、高選擇性保留能力，特別適用于復雜樣品痕量組分的凈化與富集。

Li等用SAs多克隆抗血清制成IAC柱來凈化豬肉中的SAs殘留。在4-氨基苯磺胺N1位連接間隔臂制得抗SAs特異性抗體，與免疫吸附劑混合制備IAC柱，用于凈化豬肉中SMM、SDM和SQX。樣品用甲醇-水(8+2，v/v)提取，過IAC凈化后，用HPLC-UVD檢測。該方法的LOD為1～2μg/kg：在10～100ug/kg添加濃度內(nèi)，回收率為70.8%～94.1%，RSD在3.4%～12.9%之間。龔明輝利用抗SM2簇特異性單克隆抗體制備了lAC柱，對雞肉中的SM2、SDM和SM1進行測定。利用高親和力SM2單克隆抗體與溴化氰活化的Sepharose4B進行偶聯(lián)，制備免疫親和吸附劑，對3種SAs的動態(tài)柱容量為195～16181ng/mL gel，絕對柱容量為335～404ng/mg lgG。該IAC柱每三天使用一次，重復12次后，SM2的柱容量仍能達到795ng/mL gel，滿足SAs殘留分析的要求。雞肉樣品經(jīng)甲醇水(8+2，v/v)提取，取一半提取液，加35mLPBS稀釋，過IAC柱凈化，用4mL甲醇洗脫，HPLC-UVD檢測。該方法的LOD為3ug/kg，在10～50ug/kg添加濃度，回收率為75.4%～98.5%，RSD小于7.4%。Li等以SMZ為半抗原制備單克隆抗體，該單克隆抗體對6種SAs的交差率在31%～112%之間，與溴化氰活化的Sepharose4B進行偶聯(lián)，獲得的免疫親和吸附劑來制備IAC柱，該IAC柱對13種喹諾酮和6種SAs具有吸附性。用該IAC柱凈化豬肉和雞肉中的6種SAs，LC-MS/MS檢測，方法回收率為72.6%～107.6%，RSD為11.3%～15.4%，LOQ為0.5～3ug/kg。

4)QuEChERS(Quick，Easy，Cheap，Effective，Rugged，Safe)

QuEChERS是由美國農(nóng)業(yè)部Anastasiades教授于2003年開發(fā)的，一種用于農(nóng)產(chǎn)品檢測的快速樣品前處理技術(shù)。其原理與HPLC和SPE相似，利用吸附劑填料與基質(zhì)中的雜質(zhì)相互作用，吸附雜質(zhì)從而達到除雜凈化的目的。具有回收率高，精確度好：可分析的化合物范圍廣；分析速度快；溶劑使用量少，污染小；操作簡便；裝置簡單等優(yōu)勢。

李鋒格等建立了一種基于QuEChERS前處理技術(shù)的UPLC-MS/MS殘留分析方法，用于測定雞肝中12種SAs、19種喹諾酮類和8種苯并咪唑類藥物及其代謝物。樣品用1%乙酸乙腈溶液提取，4.5mL提取液中加入200mg氨基(NH2)吸附劑，渦旋2min，4500r/min離心10min，移取3mL上清液氮氣吹干，加入1mL甲醇-DMSO-水(10+50+40，v/v)復溶，加入2mL正己烷脫脂，過濾后LC-MS/MS測定。39種藥物在5～100ug/kg添加濃度范圍內(nèi)線性良好(2>0.98)；在10～50ug/kg添加水平范圍內(nèi)，平均回收率為72%～121%，RSD為1.5%～23.4%；39種藥物的LOD為5μg/kg，LOQ為10ug/kg。曲斌等引也建立了一種以QuEChERS方法作為樣品前處理技術(shù)的UPLC-MS/MS方法，測定豬肝中20種SAs殘留。豬肝樣品以SDM-D6為內(nèi)標，置于DisQuE萃取管(50mL，內(nèi)含4g硫酸鎂、1g氯化鈉、1g檸檬酸三鈉二水結(jié)晶鹽、0.5g檸檬酸氫二鈉半水結(jié)晶鹽)中，用乙腈提取，上清液加入DisQuE凈化管(15mL，內(nèi)含900mg硫酸鎂、150mg PSA、150mg C18)凈化，上清液蒸干復溶后，用UPLC-MS/MS測定。在10～200ugkg范圍內(nèi)，各藥物均呈良好的線性關(guān)系，高中低濃度回收率在70%～115%之間，精密度小于15%。Posyniak等開發(fā)了一種快速、低成本分析雞肉中6種SAs的HPLC方法。樣品用乙腈提取，1mL提取液中加入25mgC18吸附劑，混合振蕩，上清液蒸干后用pH3.5乙酸緩沖液復溶，熒光胺衍生化，HPLC-FLD測定。該方法回收率超過90%，LOD在1～5μg/kg之間。

5)分子印跡技術(shù)(molecular imprinting technology，MIT)

MIT利用模板分子(印跡分子)與聚合物單體接觸時會形成多重作用點，通過聚合過程這種作用就會被記憶下來，當模板分子除去后，聚合物中就形成了與模板分子空間構(gòu)型相匹配的具有多重作用點的空穴，這樣的空穴將對模板分子及其類似物具有選擇識別特性，以此分子印跡聚合物(MIP)作為吸附凈化材料，建立選擇性樣品處理方法。

Xu等制備了一種新型的SM2的MIP-涂層攪拌棒，該MIP的涂層厚度大約為20um，RSD為6.7%。分別通過電子顯微鏡、紅外光譜掃描、熱重分析和耐溶劑性對MIP進行研究，與非印跡聚合物(NIP)-涂層作比較，對MIP-涂層的吸附容量和選擇性進行了詳細的評價，MIP-涂層表現(xiàn)出較高的吸附能力和選擇性。MIP-涂層的飽和吸附量是甲苯中NIP涂層的4.6倍以上，經(jīng)MIP-涂層攪拌棒吸附萃取后，可以檢測到0.2μg/L的SM2。同時，該MIP-涂層對模板類似物也具有選擇性吸附能力。

以此建立了采用MIP-涂層攪拌棒吸附萃取生物樣品中8種SAs的HPLC測定方法，并對萃取條件(萃取溶劑、萃取時間、解吸溶劑、解吸時間和攪拌速度)進行了優(yōu)化。該方法的線性范圍分別為1.0～100μg/L，LOD為0.20～0.72ugL，已成功應用于豬肉、豬肝和雞肉樣品的分析。

6)在線自動凈化(automate online clean up)

在線自動凈化具有SPE的高富集性，同時具有提取時間少、有機溶劑用量少和重現(xiàn)性好等優(yōu)點。

Naoto等開發(fā)了雞蛋中SMZ、SMM、SDM和SQ的在線自動分析方法。雞蛋樣品采用Ultrafree-MC/PL離心式超濾系統(tǒng)處理，以MightysilRP-4GP作為色譜柱，流動相為28%乙醇溶液，光電二極管陣列檢測器(PDA)檢測。一個樣品的分析時間小于30min，乙醇的用量小于5mL。在添加濃度0.1ppm、0.2ppm、0.4ppm和1.0 ppm水平，方法回收率優(yōu)于80.9%，RSD在1.3%～4.7%之間；SMZ的LOQ為0.060ppm，SMM為0.045ppm，SDM為0.044 ppm，SQ為0.093。Pereira等169建立了同時在線凈化檢測牛奶中SMX和TMP的二維HPLC法。牛奶樣品離心后，取15uL直接注入柱切換HPLC系統(tǒng)，先過RAMC18-BSA柱，0～5min用0.01mol/L pH6.0磷酸鹽緩沖液-乙腈(95+5，v/v)沖洗，去除蛋白，5min 后用0.01mol/L pH6.0磷酸鹽緩沖液-乙腈(83+17，v/v)沖洗，將分析物沖入C18分析柱；再以0.01mol/L pH5.0磷酸鹽緩沖液-乙腈(82+18，v/v)為流動相，分離分析，UVD在265nm處檢測。SMX和TMP的線性范圍分別為25～800ng/mL和50～400ng/mLLOD分別為15ng/kg、25ng/kg；不同濃度樣品添加回收率為94.4%～103.5%，CV小于15%。Fang等建立了在線SPE-HPLC檢測方法，可同時檢測雞蛋、豬肉中的SM1；等10種SAs。HPLC原有的進樣六通閥被替換為在線的預濃縮柱，SAs在柱上富集，然后被流動相洗脫。整個樣品分析過程在35min內(nèi)完成。混合標準溶液濃度為1ng/mL時，方法CV在2.5%～7.8%之間：添加濃度為4ugkg、6ug/kg、8ug/kg時，雞蛋的回收率為69.5%～81.47%，豬肉的回收率為66.35%～85.59%。

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