吡唑酮類藥殘留測定——流動注射-化學發光法

時間：2023-03-25 00:55:07來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

吡唑酮類藥殘留測定——流動注射-化學發光法

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

14.1.4.2測定方法

動物源樣品中吡唑酮類藥物的測定方法主要有流動注射化學發光檢測法、超臨界流體色譜法(SFC)、毛細管電泳法(CE)、氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)和免疫分析法等。色譜法(包括色質聯用法)具有更好的分辨率、靈敏度和重復性，是目前殘留分析中采用最多的技術;而免疫分析方法具有簡便、快速、靈敏度高等優點，應用于殘留分析越來越受到重視。

(1)流動注射-化學發光法(flow injection-chemiluminescence detection，FI-CL)

流動注射-化學發光分析法是將流動注射與化學發光相結合的-種分析方法。流動注射是指在非熱力學平衡條件下，在液流中重現處理試樣或試劑區帶的定量流動分析技術，它具有高精度、高效率、快速的特點。化學發光是基于反應體系中某種物質(反應物、產物、中間體)的分子吸收了反應所釋放的能量而由基態躍遷至激發態，然后再從激發態返回基態，同時將能量以光輻射的形式釋放出來產生化學發光。基于分子發光強度和被測物含量之間的關系建立的分析方法稱為化學發光分析法，具有靈敏度高、線性范圍寬、儀器設備簡單等優點。將二者結合而產生的流動注射化學發光分析法具有分析速度快、精度高、易實現自動化等特點。何云華等將流動注射，分子印跡技術與化學發光檢測方法相結合，分析尿液中的安乃近。利用MIP對目標分子的識別和捕獲能力，使目標分子吸附在MIP上，從而與樣品中的共存物質分離，然后進行化學發光檢測，消除共存物質的干擾，提高化學發光分析的選擇性。向一根4mm×15mm的玻璃管內填充10.0mg分子印記材料，兩端塞少許玻璃棉，使用前，使錳(IV)溶液和甲醛溶液的合并流通過MIP柱，除去MIP上的模板分子安乃近。當試劑合并流通過MIP柱時，與柱上吸附的安乃近發生化學發光反應，產生發光信號，隨著MIP中安乃近的不斷消耗，發光信號逐漸降低，當其與背景信號相同時，即可認為MIP柱中安乃近已經除盡。該方法線性范圍為1.0×10-7～1.0×10-5mol/L，LOD為4×10-8 mol/L，對1.0×10-6 mol/L安乃近溶液平行測定7次，RSD為2.4%，可用于尿液中安乃近的直接測定。

(2)超臨界流體色譜法(supercritical fluid chromatography，SFC)

SFC是以超臨界流體做流動相，依靠流動相的溶劑化能力來進行分離、分析的色譜過程，是20世紀80年代發展和完善起來的一種新技術。Simmons等利用SFC測定血清中保泰松和羥布宗。色譜柱為Deltabond ODS (250 mm×1mm)，流動相為二氧化碳-甲醇(95+5，v/v)，泵壓為170大氣壓，爐溫85～90℃，紫外檢測波長為240nm，測定時間為10～12min。該方法LOD為0.1μg/mL(保泰松)和1.0μg/mL(羥布宗)，CV為0.24%～4.94%，回收率在82%～83%之間。

(3)毛細管電泳法(capillary electrophoresis， CE)

CE是在電場作用下，利用毛細管中被分析的帶電分子因移動速率的不同而達到分離的目的，是以毛細管為分離通道，以高壓直流電場為驅動力的新型液相分離技術。分析時，將毛細管內充滿電解液，毛細管兩端通高壓電，使電解液內帶電分子移動到毛細管相反電荷的一端。分子大小不同，電荷比不同，在管中移動的速率也不同，從而到達毛細管終點有快有慢，依此分離不同分子。Perrett等采用CE測定唾液中的安替比林。唾液樣品離心后直接進CE測定。緩沖液為25mmol/L四硼酸鈉和50 mmol/L SDS (pH 9.6)，水動力(hydrodynamic)上樣，上樣時間10s，運行電壓25kV，溫度25℃，進樣量50uL，檢測波長為260nm。該方法回收率為99.6%±4.8%，LOD為10 umol/L。

(4)氣相色譜法(gas chromatography， GC)

GC具有高效的分離能力和較高的靈敏度，能對樣品進行有效分離。同時，滿足檢測器對待測物單一性的要求，極大地提高了對混合物的分離、定性和定量分析效率。GC分析安替比林及其代謝物可選用氮磷檢測器(nitrogen-phosphorus detector，NPD)和火焰離子化檢測器(flame ionization detector，FID)。氨基比林、安替比林及其代謝物可以不衍生直接測定”。

1)NPD檢測

Abernethy等檢測血漿中安替比林和氨基比林殘留，用GC-NPD測定。色譜柱為填充3% SP-2250的玻璃柱(1.83m×2mm)，載氣為氦氣，流速為30mL/min，檢測器清洗氣為氫氣和干燥空氣，流速分別為3mL/min、50mL/min，進樣口溫度310℃，柱溫230℃，檢測器溫度275℃。該方法LOD為1μg/mL，回收率大于95%，CV小于6.6%。Shively等測定唾液中的安替比林和氨基比林，氯仿提取液轉換溶劑后，不衍生直接進GC-NPD測定。色譜柱為裝填3% SP-2250 DB的玻璃柱，不分流進樣，進樣體積1μL，柱溫、進樣口溫度和檢測器溫度分別為230℃、250℃和275℃，載氣為氦氣，流速4mL/min。安替比林和氨基比林的線性范圍均為0～10μg/mL，CV為1.7%和2.4%，平均回收率為87%和95%。

2)FID檢測

Inaba等采用GC測定了尿液中安替比林代謝物。經酶解的尿液樣品用乙酸乙酯提取后，不衍生直接進GC-FID測定。色譜柱為裝填3% OV-17的玻璃柱(2mm×120cm)，柱溫為195℃，載氣為氮氣，流速30mL/min尿液中NORA的LOD為1pg/mL，OHA為10pg/mL；NORA的CV小于3.1%，OHA為8.9%。

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