牛奶和奶粉中7種喹諾酮類藥物殘留量測定分析條件的選擇

時間：2023-03-25 02:28:47來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

牛奶和奶粉中7種喹諾酮類藥物殘留量測定分析條件的選擇

[db:作者] / 2022-12-19 00:00

11.2.3.7 分析條件的選擇

(1)樣品前處理方法的優(yōu)化

牛奶和奶粉中含有大量的脂肪和蛋白質，傳統(tǒng)的提取方法容易產(chǎn)生乳化現(xiàn)象。嘗試用10%三氯乙酸：乙腈(9：1)作為提取劑，采用HLB，60mg/3cm3(WatersOasis)凈化，7種喹諾酮的回收率在43%～64%之間。將1%偏磷酸：乙腈(7：3)作為提取劑，濃縮乙腈后同樣采用HLB，60mg/3cm3(WatersOasis)凈化，回收率較低。結果表明，加入沉淀劑以后提取溶液容易凈化，但是回收率偏低，可能在沉淀蛋白的同時造成藥物的絡合或挾裹，造成損失。鑒于乙腈本身具有沉淀蛋白的作用，且條件較為溫和，采用乙腈及酸化乙腈作為提取劑，經(jīng)過大量的試驗確定了乙腈及酸化乙腈的用量；通過結果比較，乙腈與酸化乙腈沒有顯著差異，最終確定以乙腈作為提取溶劑的實驗方案。試驗證明，提取兩次的回收率遠大于提取一次。參考GB/T20757-2006《蜂蜜中十四種喹諾酮類藥物殘留量的測定方法液相色譜法-串聯(lián)質譜法》，提取劑中加入pH=3磷酸鹽溶液，同時解決了乙腈沉淀蛋白能力較強，第二次提取時牛奶和奶粉中的固狀物不能充分在乙腈中溶解出現(xiàn)絮狀沉淀的問題。

固相萃取技術是比較有效的凈化手段，本方法對比了HLB，60mg/3cm3(WatersOasis)、MCX60mg/3cm3(WatersOasis)、BONDELUT-SCX，500mg/3mL三種固相萃取柱的凈化效果，試驗表明三種固相萃取柱的凈化效果均良好，但HLB柱回收率略高，因此本方法選擇HLB柱作為凈化柱。由于采用HLB柱凈化，上樣液中不能含有太多的乙腈，因此需要將提取液中的乙腈蒸干。

洗脫時，做流出曲線，采用3mL5%氨水甲醇可將7種喹諾酮完全洗脫下來，所以采用4mL 5%氨水甲醇作為洗脫液。該七種藥物中達氟沙星熱穩(wěn)定性差，在45℃氮吹吹干，就有將近50%的損失，濃縮一步應注意不能將其完全吹干，待洗脫液吹至約0.2mL時，利用定容液將其補至1mL。

(2)色譜條件的建立

實驗采用了0.1%乙酸-甲醇做流動相，采用梯度洗脫，在150mm×2.1mm(i.d.)，粒度5μum的C18柱上，分析物得到了有效的分離，且峰形對稱尖銳。

(3)質譜條件的優(yōu)化

用蠕動泵以10uL/min注入1μg/mL的7種喹諾酮混合標準溶液來確定各化合物的最佳質譜條件，包括選擇特征離子對，優(yōu)化電噴霧電壓、鞘氣、輔助氣、碰撞能量等質譜分析條件。來確定各化合物的最佳質譜條件，包括選分析物的混標液進入ESI電離源，在正、負離子掃描方式下分別對分析物進行一級全掃描質譜分析，得到分子離子峰。7種分析物在正模式下均有較高的響應，負模式下信號值很低。然后對各分子離子峰進行二級質譜分析(多反應監(jiān)測MRM掃描)，得到碎片離子信息。其具體的質譜條件為：鞘氣壓力，30unit；輔助氣壓力，5unit；正離子掃描模式；電噴霧電壓，4000V；毛細管溫度，320℃；源內誘導解離電壓，10V；Q1和Q3狹縫寬度為0.4、0.7；碰撞氣為高純氬氣，碰撞氣壓力為1.5mTorr。分析物的保留時間采集窗口確定定性定量離子對及碰撞能量見表11-11。

(4)定量方式的選擇

實驗對比了外標法和內標法兩種定量方式，由于只有氘代環(huán)丙沙星和氘代恩諾沙星兩種，且采用外標法定量回收率較高，精密度較好，因此，用外標法定量。

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